1. lépés: Oldjuk fel a nyers Melanotan I peptidet 100 ml tisztított vízben, és szűrjük át az elegyet egy 0,45 μm-es membránon, hogy nyers peptid oldatot kapjunk.
2. lépés: Tisztítsa meg a nyers Melanotan I peptidet nagy teljesítményű folyadékkromatográfiával (HPLC). Használjon DAC-HB50 dinamikus axiális kompressziós oszlopot gradiens elúciós eljárással, a Mobile Phase A (0,05 tömeg% trifluor-ecetsav vízben) és a Mobile Phase B (0,05 tömeg% trifluor-ecetsav acetonitrilben) alkalmazásával. Kövesse nyomon a mintát UV-detektorral, és gyűjtse össze frakciókban a célcsúcsnak megfelelő peptidoldatot.
3. lépés: HPLC-s tisztítást követően 180 ml Melanotan I trifluor-acetát oldatot kapunk, amelynek tisztasága meghaladja a 99%-ot; ezt rotációs bepárlóval betöményítve 50 ml oldatot kapunk.
Step 4: Equilibrate the chromatography column with deionized water and load the sample (50 mL of the Melanotan I trifluoroacetate solution with >99%-os tisztaság). 50 percig eluáljuk 2%-os vizes ecetsav-rendszerrel. Az összegyűjtött célterméket rotációs bepárlóval 80 ml-re koncentráljuk, majd előliofilizálásnak és liofilizálásnak vetjük alá. Végül 5,33 g nagy tisztaságú Melanotan I peptidet kapunk, ami 32,33%-os hozamot jelent.